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用elisa试剂盒检测样本的原理和步骤

作者:北京雅安达生物技术有限公司 2014-08-29T14:44 (访问量:3066)

用elisa试剂盒检测样本的原理和步骤

表达产物的检测

(一)真核表达产物

1、 细胞上清(分泌性蛋白)

1.2、贴壁细胞或半贴壁,直接将细胞培养上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作为标本进行检测,如有需要可进行透析或纯化处理;

1.2、不贴壁细胞,将培养基和细胞转移至10ml离心管,500-800rmp x10min,吸取上清至另一10ml离心管中,10000rmp x10min, -20℃或4℃保存,作为标本进行检测,如有需要可进行透析或纯化处理;

2、 细胞裂解物(非分泌性蛋白)

2.1、贴壁细胞或半贴壁,直接将细胞培养上清吸出,然后用001M PBS(pH 7.4)将细胞吹下至10ml离心管,500-800rmp x10min,弃上清,沉淀转移至1.5ml离心管中, DDW重悬,置冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作为标本进行检测,如有需要可进行透析或纯化处理;

2.2、不贴壁细胞,将培养基和细胞转移至10ml离心管,500-800rmp x10min,弃上清,沉淀移至另一10ml离心管中,0.01M PBS(pH 7.4)重悬,500-800rmp x10min,弃上清,沉淀移至1.5ml离心管中, DDW重悬,置冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解,10000rmp x10min,取上清, -20℃或4℃保存,作为标本进行检测,如有需要可进行透析或纯化处理。

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