产品说明
唾液酸一类九碳酸性单糖的N-或O-衍生物总称。这些糖中最常见的成员是N-乙酰神经氨酸(NANA)。 唾液酸广泛分布在哺乳动物组织和体液(如血清)中。唾液酸寡糖已被证实具有抗病毒特性，还会影响血液凝固和胆固醇水平。 体液中唾液酸的含量也是诊断癌症的重要指标。简单、直接和自动化测量唾液酸浓度的方法应用广泛。BioAssay Systems用一种酶反应的工作试剂检测样品中唾液酸的含量。反应产物在570nm的光密度或荧光强度(585/530nm)与样品中唾液酸的浓度成正比。
产品特点
灵敏、准确：仅用10µL样品，检测范围：比色法0.02-1 mM，荧光法2-100 µM唾液酸。
简单、方便：使用一种工作试剂，室温下反应60分钟可测游离唾液酸；或通过水解处理得到总唾液酸含量。
产品用途
直接检测：生物样品中唾液酸含量。
试剂盒组成
缓冲液： 10 mL | 显色剂 ：120 mL | 酶试剂：120 mL |
标准品：500 mL10 mM | 水解试剂：10 mL | 中和试剂：5 mL |
储藏条件：该试剂盒用冰袋运输。所有组份在-20°C下保存。保质期3个月。
预防措施：本产品仅供研究用。使用过程中严格遵循实验安全措施。
唾液酸水解步骤
注意：测量游离唾液酸不需此步骤。
1、将20 mL样本和80 mL水解液混合加入离心管中。在80°C下反应60分钟。
2、让样品冷却到室温并在14000转/分的转速下离心1分钟。
3、在每个水解反应管中加20 mL中和试剂, 混匀，在14000转/分的转速下离心几秒。样品可用于总唾液酸的检测。
比色法测试
注意：含有巯基的试剂(如：巯基乙醇、二硫苏糖醇)会干扰反应，在样品准备过程中避免使用。
1、将所有组分放置至室温。酶试剂置冰上或冰箱中。 混合50mL 10mM的标准品和450mL蒸馏水得到1mM标准液。按照下表加入蒸馏水稀释标准液。
No | Premix + H2O | Vol (mL) | Sialic Acid (mM) |
1 | 100mL + 0mL | 100 | 1.0 |
2 | 60mL + 40mL | 100 | 0.6 |
3 | 30mL + 70mL | 100 | 0.3 |
4 | 0mL + 100mL | 100 | 0 |
转移10 µL稀释后的标准液和10 µL样品到平底透明的96孔板的不同孔中。
2、 配制足够的工作试剂。对于每个反应孔，混合93µL缓冲液, 1µL显色剂和1µL酶试剂。在每个孔内加入90µL工作试剂。轻击平板混匀。
、室温下反应60分钟。在570nm (550-585nm)读吸光值。注意：若样品的OD值高于1mM标准液的OD值，用水稀释样品重新测试，将得到的结果乘以稀释倍数n。
浓度计算
标准品吸光值减去空白对照的吸光值 (#4)，得出标准曲线的斜率(Slope)，计算样品唾液酸的浓度。
ODSAMPLE和ODH2O是样品和水的吸光值，n是稀释倍数(水解样品n = 6)。
单位换算：1 mM NANA = 30.9 mg/dL 或 309 ppm。
荧光法测试
1、荧光法的线性范围是2-100 µM唾液酸。将比色法的标准液以1:10的比例稀释。 转移10 µL稀释后的标准液和10 µL样品到黑色96孔板的不同孔中。
2、在每个孔内加入90µL工作试剂(见比色法的步骤)，轻敲平板混匀试剂。
3、在常温下反应60分钟并在λex = 530nm和λem = 585 nm处读荧光强度。
如果在384孔板测试，用5µL标准液和45µL工作试剂。
计算样品唾液酸的浓度：
FSAMPLE和FH2O是样品和水的荧光强度，n是稀释倍数。
实验必需品(未提供)
移液装置，离心管，透明平底96孔板，光密度阅读仪，黑色平底96孔板或384孔板，荧光板阅读仪。
参考文献
[1]. Sugahara, K. et al. (1980). Enzymatic Assay of Serum Sialic Acid. Clinica Chimica Acta 108:493-8.
[2]. Simpson, H. et al. (1993). Serum sialic acid enzymatic assay based on microtitre plates: application for measuring capillary serum sialic acid concentrations. Br J Biomed Sci. 50:164-7.
